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1. 親和層析的基本原理：

在生物分子中有些分子的特定結(jié)構(gòu)部位能夠同其他分子相互識別并結(jié)合，如抗原和抗體的識別結(jié)合、酶與底物（包括酶的競爭性抑制劑和輔助因子）的識別結(jié)合、激素與受體的識別結(jié)合，核酸中的互補(bǔ)鏈、多糖與蛋白復(fù)合體等等，這種結(jié)合既是專一的，又是可逆的。生物分子間的這種結(jié)合能力就稱為親和力。

將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和介質(zhì)制成固相吸附劑放置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開，然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘?，改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來，這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。

親和層析具有高選擇性、高活性回收率、高純度，且純化過程簡單、迅速，分離效率高等特點(diǎn)，對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效，成為生化工程中分離提純生物活性物質(zhì)的重要方法。但親和層析必須針對某一分離對象，制備專一的層析介質(zhì)和尋求層析的穩(wěn)定條件，因此親和層析的應(yīng)用范圍受到了一定的限制。

2. 載體的基本要求和選擇：

理想的載體應(yīng)具有下列基本條件：（1）不溶于水，但高度親水；（2）惰性物質(zhì)，非特異性吸附少；（3）具有相當(dāng)量的化學(xué)基團(tuán)可供活化；（4）理化性質(zhì)穩(wěn)定；（5）機(jī)械性能好，具有一定的顆粒形式以保持一定的流速；（6）通透性好，最好為多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使大分子能自由通過；（7）能抵抗微生物和醇的作用。

3. 影響層析分離的主要因素：

影響親和層析分離的主要因素有：（1）離子強(qiáng)度，主要影響靜電作用和疏水性相互作用；（2）pH值，通過改變配基和蛋白質(zhì)上帶電基團(tuán)的離子化程度對親和結(jié)合產(chǎn)生影響；（3）抑制氫鍵形成的物質(zhì)，如脲和鹽酸胍，主要削弱親和結(jié)合作用力中的氫鍵；（4）溫度的改變會使分子和原子的運(yùn)動劇烈程度發(fā)生改變，從而對親和作用產(chǎn)生影響；（5）在親和體系中加入一些離子或螯合劑，也將影響親和作用力。